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使用酶標分析儀檢測嬰兒奶粉中三聚氰胺的案例

時間:2021-06-23 02:06:37 點擊次數:587
        酶標分析儀檢測三聚氰胺殘留量的方法。用提取液將樣品中三聚氰胺均質振蕩提取。首先將三聚氰胺酶標記物、樣品提取液和標準品加入涂有三聚氰胺抗體的微孔開始反應。在30分鐘的孵育過程中,樣品提取液中的三聚氰胺與三聚氰胺酶標記物競爭,與微孔中的三聚氰胺抗體結合。孵育30分鐘后,微孔中所有未結合的三聚氰胺和三聚氰胺酶標記物都被沖洗掉。用去離子水洗滌后,在每孔中加入一種清晰的底物溶液,結合酶標分析儀標記將無色底物轉化為藍色物質。孵育30分鐘后停止反應,根據各孔顏色深度讀取數據。根據標準顏色,得到樣品中三聚氰胺的濃度值。

  一、酶標儀檢測嬰兒奶粉中三聚氰胺所需準備的材料:

      1、蒸餾水或去離子水

      2、可吸取50ul100ul的移液器及吸頭

      3、4000轉離心機

      4、吸水紙或相當的吸水材料

      5、450nm的酶標儀

      6、計時器

       7、20mM PBS:需自行配制

      8、清洗液:需自行配制

二、酶標儀檢測嬰兒配方奶粉中三聚氰胺試劑配制:

     1、20mM PBS 0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl,蒸餾水定容至1000ml

     2、清 液: 0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl,蒸餾水定容至1000ml.+0.5ml 土溫20

      3、樣品萃取液:稱85g氯化鈉定容到1L,搖勻,取出25ml加入25ml蒸餾水,再加入50ml 100% 甲醇,搖勻

      4、樣品稀釋液:0.31g磷酸二氫鈉加上2.87g的磷酸氫二鈉定容到1L,加入100ul吐溫20,搖勻

三、酶標儀檢測嬰兒配方奶粉中三聚氰胺樣品的前處理:  
       嬰兒配方奶粉(稀釋倍數:15

     1、稱2g奶粉,加入6ml樣品萃取液,混勻;

     2、4000轉離心5min;

     3、取0.2ml上清液加入到0.8ml樣品稀釋液中稀釋5倍;

 

     4、取150ul測定;

四、酶標儀測定嬰幼兒配方奶粉中三聚氰胺的步驟:
 
    1. 將所有試劑和樣品放回室溫20-28℃,但時間不要超過24小時;
 
    2. 從鋁箔袋中取出所需數量的微孔條,固定在微孔板架上,將未使用的微孔條與干燥劑一起放入密封袋中存放;
 
    3.用吸管將150ul標準品和樣品吸入相應的微孔。確保每一種溶液都是用干凈的吸管來繪制的,以避免交叉污染。加入每孔加入50ul三聚氰胺酶標記物;
 
    4. 輕輕搖動盤子60秒,20-28攝氏度孵育30分鐘;
 
    5. 將微孔中的溶液倒入水槽中,將清洗液填滿微孔,搖勻丟棄,重復三次,共四次清洗盤子;
 
    6. 清洗一次后,將溶液倒進孔中,然后翻轉微孔板,在吸水紙上輕拍干燥;
 
    7. 每個微孔加入100ul底物溶液;
 
    8. 20-28℃孵育30分鐘;
 
   9. 每個微孔加入100ul停止液;

 

   10. 用酶標儀在450nm下讀板

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