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使用酶標儀檢測雞蛋中三聚氰胺的操作方法

時間:2021-05-19 01:47:18 點擊次數:564
      酶聯吸附法測定三聚氰胺殘留量的方法。用提取液將樣品中三聚氰胺均質振蕩提取樣品。首先將三聚氰胺酶標記物、樣品提取液和標準品加入涂有三聚氰胺抗體的微孔開始反應。在30分鐘的孵育過程中,樣品提取液中的三聚氰胺與三聚氰胺酶標記物競爭,與微孔中的三聚氰胺抗體結合。孵育30分鐘后,微孔中所有未結合的三聚氰胺和三聚氰胺酶標記物都被沖洗掉。用去離子水洗滌后,在每孔中加入一種清晰的底物溶液,結合酶標儀將無色底物轉化為藍色物質。孵育30分鐘后停止反應,根據各孔顏色深度讀取數據。根據標準顏色,得到樣品中三聚氰胺的濃度值。

一、酶標儀檢測雞蛋中三聚氰胺所需的材料:

1、蒸餾水或去離子水

2、可吸取50ul和100ul的移液器及吸頭

3、4000轉離心機

4、吸水紙或相當的吸水材料

5、450nm的酶標儀

6、計時器

7、20mM PBS:需自行配制

8、清洗液:需自行配制

二、酶標儀檢測雞蛋中三聚氰胺試劑配制:

1、20mM PBS: 0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl,蒸餾水定容至1000ml

2、清 洗 液: 0.62g NaH2PO4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl,蒸餾水定容至1000ml.+0.5ml 土溫20

三、酶標儀檢測雞蛋中三聚氰胺樣品的前處理:    雞蛋(稀釋倍數:5)

1、稱1g混合好的全蛋,加入5ml的10%甲醇/20Mmpbs,震蕩2min;

2、4000轉離心5min;

3、取2ml 上清液加入2ml異辛烷:氯仿(2:3),混勻;

4、4000轉離心5min,取上層150ul測定。

四、酶標儀檢測雞蛋中三聚氰胺的測定過程:

1. 將所有試劑和樣品放回室溫20-28℃,但時間不要超過24小時;

2. 從鋁箔袋中取出所需數量的微孔條,固定在微孔板架上,將未使用的微孔條與干燥劑一起放入密封袋中存放;

3.用吸管將150ul標準品和樣品吸入相應的微孔。確保每一種溶液都是用干凈的吸管來繪制的,以避免交叉污染。加入每孔加入50ul三聚氰胺酶標記物;

4. 輕輕搖動盤子60秒,20-28攝氏度孵育30分鐘;

5. 將微孔中的溶液倒入水槽中,將清洗液填滿微孔,搖勻丟棄,重復三次,共四次清洗盤子;

6. 清洗一次后,將溶液倒進孔中,然后翻轉微孔板,在吸水紙上輕拍干燥;

7. 每個微孔加入100ul底物溶液;

8. 20-28℃孵育30分鐘;

9. 每個微孔加入100ul停止液;

10. 用萊恩德酶標儀在450nm下讀板。

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