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酶標儀測量波長的設定以什么為標準?酶標儀和普通的光電比色的差異

時間:2022-03-10 15:39:41 點擊次數:46
 

    實驗中波長的選擇主要依賴于你要測的樣品。樣品在不同的波長下,對光的吸收值也不同,但都有一個吸收峰,一般選擇吸收峰時的波長進行實驗。比如同樣是MTT法做細胞毒性實驗,就有使用490nm和570nm兩種波長選擇,如果使用了DMSO作為試劑,在溶解后呈紫(紅)色,在490nm有最大吸收值;而對于SDS和酸化異丙醇,則選用570nm(655nm作為參考波長)。

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    酶標儀波長設定還要看你用的是什么酶標儀,如果是光柵式單色器(可以1nm步進調節),就可以直接設定吸收峰的波長;如果是濾光片式單色器,因為受濾光片波長限制,有時你就需要選接近使用波長的濾光片,比如655nm,你就可能選用650nm的濾光片。


    酶標儀和普通的光電比色計有以下幾點差異:


    (1)盛裝待測比色液的容器不再使用比色皿,而是使用塑料微孔板。微孔板常用透明的聚乙烯材料制成,對抗原抗體有較強的吸附作用,故用它作為固相載體。


    (2)由于盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的,光線只能垂直穿過,因此酶標儀的光來都是垂直通過待測溶液和微孔板的,光束既可是從上到下,也可以是從下到上穿過比色液。


    (3)酶標儀通常不僅用A,有時也使用光密度OD來表示吸光度。


    酶標儀可分為單通道和多通道2種類型,單通道又有自動和手動2種之分。自動型的儀器有X,Y方向的機械驅動機構,可將微孔板L的小孔一個個依次送入光束下面測試,手動型則靠手工移動微孔板來進行測量。


    在單通道酶標儀的基礎上又發展了多通道酶標僅,此類酶標僅一般都是自動化型的。它設有多個光束和多個光電檢測器,如12個通道的儀器設有12條光束或12個光,12個檢測器和12個放大器,在X方向的機械驅動裝置的作用下,樣品12個為一排被檢測。多通道酶標儀的檢測速度快,但其結構較復雜價格也較高。


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