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酶標儀選購的幾個關鍵參數

時間:2022-03-24 14:28:25 點擊次數:99
 

  酶標儀作為一個常用的儀器,其基本功能不外乎一個比色測定,與比色計所不同的是在測定波長范圍、吸光度范圍、光學系統、檢測速度、震板功能、溫度控制、定性和定量測定軟件功能等方面的差異,當然全自動酶免疫分析系統還具有自動洗板、溫育、加樣等功能。我們在選購酶標儀時應該考慮如下幾個關鍵參數:

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  一、濾光系統


  酶標儀最簡單的是用濾光方式來劃分。一般來說,可以分為濾光片型和光柵型兩大類。也有一些酶標儀里面同時裝上了濾光片和光柵。但是濾片和光柵并不能同時完成同一個檢測,本質上還只是把濾片和光柵放在了一起,并沒有使兩者糅合而產生新的技術突破。


  光柵型濾光系統具有使用方便,可以進行光譜掃描,靈活性等優點。當然,濾光片系統也有其顯著的優勢,例如價格較為便宜,檢測靈敏度高,帶寬的可選擇性,可以進行快速的濾光片切換,可配備有自動加樣系統,在化學發光檢測中光線的透過率高。


  目前,濾光片系統應用更廣,因為它可以讓實驗者完成更多的試驗。


  二、測定波長


  一般酶標儀的測定波長在400~750nm或800nm之間,完全可以滿足ELISA的顯色測定。目前國內常見的ELISA試劑盒所使用的標記用酶均為辣根過氧化物酶(HRP),底物通常為四甲基聯苯胺(TMB)和鄰苯二胺(OPD),其在過氧化氫溶液的存在下,經HRP作用,分別氧化為2,2,—二氨基偶氮苯(DAB)和聯苯醌。當pH值為5.0左右時,DAB在450nm波長處有最大吸收,當pH值降為L 0時,最大吸收波長移至492 nm,同時摩爾消光系數變大,顯色加深,因而常用強酸如硫酸或鹽酸終止反應。TMB的氧化產物聯苯醌在波長450nm處有最大消光系數,如果HRP量少,H:O:和TMB過量時,則形成藍色的陽離子根。降低pH,即可使藍色的陽離子根轉變為黃色的聯苯醌,使用硫酸作為終止劑可使產物穩定90min。因此,450nm和492 nm兩個波長是目前ELISA測定最常用的。各種酶標儀都配有放置濾光片的可自動轉換的部件,可以同時安裝6~8片濾光片,所配備的濾光片均應包括上述兩個波長,有的酶標儀以490nm濾光片替代492nm濾光片,影響不大。除了這兩個基本濾光片外,考慮到雙波長比色的需要,還應有620nm或630nm或650nm和405nm波長的濾光片,其他濾光片可根據自己的需要選擇。有時,有的實驗室希望用酶標儀作微量生化測定,故酶標儀生產廠家對其生產的酶標儀擴展了紫外檢測功能,此時需要一個340 nm波長濾光片。此時,酶標儀的測定波長范圍就成為340—750nm或800nm。


  酶標儀有單波長和雙波長檢測功能。有時使用者不知在什么情況下使用單或雙波長檢測。所謂的“單波長”就是使用一種對顯色具最大吸收的波長即450 nm或492 nm進行比色測定;而“雙波長”則除了用對顯色具最大吸收的波長即450 nm或492 nm進行比色測定外,同時用對特異顯色不敏感的波長如630 nm進行測定,酶標儀最后打印出來的吸光度則為二者之差。630 nm波長下得到的吸光度是非特異的,來自于板孔上諸如指紋、灰塵、臟物等所致的吸收。因此,在ELISA比色測定中,最好使用雙波長,且不必設空白孔。


  三、測定的吸光度范圍


  通常,酶標儀的吸光度測定范圍在0~2.5之間即可以滿足ELISA的測定要求。早期的酶標儀可測定的吸光度一般在0~2.5之間,但現在基本上都做了拓寬,可達到3.5以上,并且能保持很好的精密度與線性。因此,對于酶標儀的吸光度范圍不必去刻意追求大的吸光度范圍,主要要看在一定的吸光度范圍內的線性和精密度如何。


  四、光學系統


  酶標儀的光學系統采用的是垂直光路多通道(通常為8或12通道,亦有單通道)檢測,一般為硅光管或光導纖維,除測定通道外,有的酶標儀還有一個參比通道,每次測定可進行自我校準。酶標儀的光學系統功能如何,均可通過酶標儀測定的吸光度范圍、線性度、精密度和準確度等體現出來。光學系統好的話,則上述指標也應較佳。測定的精密度與測定通道之間的均一性有直接關系。單通道可避免因通道不同所致的差異。


  五、檢測速度


  酶標儀的檢測速度是指其完成比色測定所需要的時間。檢測速度快,有利于提高檢測的精密度,即避免由于測定過程中,因測定時間不同所致的各微孔間吸光度間的差異。目前市場上常見的酶標儀檢測速度都非???,通常在數秒鐘內。


  六、震板功能


  酶標儀的震板功能是指酶標儀在對ELISA板孔進行比色測定前對其進行振蕩混勻,使板孔內顏色均一。目前市場上常見的酶標儀均有震板功能,所不同的是震板方式,有的可按上下、左右或旋轉等方式及振蕩幅度等任意調節;有的則較為固定。使用有震板功能的酶標儀,在進行ELISA測定顯色反應完成加入終止劑后,可不必振蕩混勻,直接放人酶標儀上測定即可。


  七、溫育功能


  溫育功能是指酶標儀本身能按要求自動精確地控制儀器內部的溫度,使得ELISA測定中微孔板條的溫育過程可在儀器內部完成,而無需再外配溫箱。目前,只有少部分酶標儀具有此種功能,溫育功能只是酶標儀的一個附加功能,是否具有并不能說明酶標儀檔次的高低及儀器的優劣。作為實驗室是否選擇,則可根據自己實驗室的條件及需要來決定。


  八、軟件功能


  軟件功能是指酶標儀所具有的對ELISA定性和定量測定及其他測定方式如酶標動力學、紫外和凝集等數據的統計分析并報告結果的功能。軟件功能是中高檔酶標儀的一個非常重要的功能。如果硬件方面區別不大,則軟件就成為判定酶標儀優劣的惟一指標。對于用戶來說,好的軟件功能,對實際工作會有較大的幫助。ELISA定性測定,酶標儀如具有陽性判斷值(cut-off)及其測定“灰區”(即指測定吸光度處于cut—off周圍的一定區域,此區域內結果應為“可疑”)的統計計算功能,不但方便了實驗室工作人員,而且在某些特定的情況下,有很高的實用價值。因此,如目的是定量測定,則在酶標儀的軟件功能中,最好要有這種曲線回歸方程計算分析功能。其他諸如連點、直線等回歸計算,則可根據酶標儀的應用目的而定,如兼用于微量生化測定,則此類回歸計算就很有必要。


  此外,酶標儀兼做酶標動力學、凝集反應測定所需的軟件是否應具備,當然也應根據使用目的而定。由于此類軟件一般都較為昂貴,酶標儀常另外單獨按需配備,如果不是實驗室特殊需要,就不必強求這種軟件功能。


  九、語言界面


  通常進口的中高檔酶標儀人機對話多采用英文。這對于某些基層實驗室可能會存在語言方面的困難,從而難以最大限度地發揮酶標儀的作用。為解決這方面的問題,已有一些酶標儀采用了中文界面。這樣就大大方便了廣大基層實驗室技術人員的使用。


  綜上所述,盡管酶標儀的發展極為快速,種類繁多,功能也不斷加強,但其最根本的功用是不變的,即比色測定。大凡比色測定,其基本要求就是在一定吸光度范圍內要有好的測定準確性、線性和精密性。同樣的吸光度范圍,測定的準確性、線性和精密性越好則酶標儀亦越佳。


  而且,由于用于酶標儀比色測定的為多孔(通常為96孔)微孔板條,為保證測定的孔間重復性,則測定速度也是一個較重要的性能指標。至于其他如震板、溫育及有關的軟件功能,則是選配功能,不影響酶標儀其他的使用性能。



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